细胞株的复苏是细胞培养过程中的重要环节：
一、前期准备
1. 人员与环境准备
- 细胞株复苏前，需确保操作人员具备相关的专业知识和技能，熟悉细胞株的特性及复苏流程。操作人员应穿戴好实验服、手套等防护装备，做好个人防护。
- 细胞培养室应保持清洁、无菌，提前用紫外线灯照射或甲醛熏蒸等方式对操作台面、空气等进行消毒处理。同时，要调节好培养室的温度和湿度，一般温度保持在37℃左右，相对湿度在95%以上，以提供适宜的细胞生长环境。
2. 器材与试剂准备
- 准备好细胞培养瓶或培养皿、移液管、离心管、吸管、酒精灯、镊子等实验器材，并确保其均已经过严格的灭菌处理。
- 配置好相应的培养基，根据细胞株的种类选择合适的培养基类型和配方，加入血清、抗生素等必要的添加剂。将培养基预热至37℃，以提高细胞复苏后的适应能力。同时，准备好胰蛋白酶等消化液，以便后续对细胞进行传代培养。
二、复苏操作步骤
1. 取出冻存细胞株
- 从液氮罐中小心取出含有细胞株的冻存管，注意避免冻伤。检查冻存管是否有裂缝或破损，如有则不能使用。
2. 快速解冻
- 迅速将冻存管放入37℃的水浴中，轻轻摇晃，使冻存液尽快融化。注意不要让水进入冻存管内，以免污染细胞。一般来说，在1-2分钟内使冻存液融化即可。
3. 转移细胞
- 用酒精棉球擦拭冻存管外壁，然后在超净工作台中打开冻存管。用吸管将融化的细胞悬液转移到预先准备好的含有适量培养基的离心管中，轻轻吹打混匀。
4. 离心洗涤
- 将离心管放入离心机中，按照适当的转速(一般为800-1000转/分钟)离心3-5分钟，去除上清液中的冻存液成分，以减少其对细胞的损伤。然后加入适量的培养基重悬细胞，再次离心洗涤，重复2-3次。
5. 接种培养
- 将洗涤后的细胞沉淀用适量的培养基重悬，制成单细胞悬液。然后根据细胞株的生长特性和实验需求，将细胞悬液接种到培养瓶或培养皿中，放入培养箱中培养。
6. 观察与记录
- 在细胞复苏后的最初几个小时内，要密切观察细胞的形态、贴壁情况等，判断细胞是否复苏成功。同时，记录细胞的生长状态、换液时间、传代时间等信息，以便后续对细胞株的培养和管理。
三、注意事项
1.细胞复苏过程应尽量快速完成，减少细胞在体外暴露的时间，以提高细胞的存活率。
2. 严格遵循无菌操作原则，避免细菌、真菌等微生物的污染。
3. 不同类型的细胞株可能具有不同的生长特性和复苏要求，因此在复苏前应充分了解细胞株的相关信息，并根据实际情况调整复苏方法和条件。
